背景
柱后衍生的方法在分析行业有着广泛的使用，一般用于在产品质检过程中的定性及定量测定，例如，水中的草甘膦及氨基甲酸酯类农残的测定；海洋生物中毒素的测定；粮油产品中黄曲霉的测定，食品、药品、饲料等氨基酸的测定等，日常的应用比较广泛。
除此之外，柱后衍生的方法其实科研项目的研究中也发挥着不可小觑的作用，辅助ICP-MS、LC-MS及TOF等进行后续提取物的化学及生物性能的分析，以确认最后的走向。本文介绍了几种柱后方法在科研项目中的应用，涉及到美容，生物医药等行业。
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案例一
01
2023年7月由Huiji Zhou , Tingzhao Li , Bo Li , Shuai Sun发表在Heliyon上的，关于通过HPLC柱后生物活性测定签订芍药花提取物、酪氨酸酶抑制剂和自由基清除剂的皮肤健康特性，其中他们运用UPLC-PDA-ESI-QTOF-MS/MS初步鉴定了27种化合物，随后应用柱后衍生化法进行了在线抗氧化剂的分析，通过与底物的柱后反应评估各个化合物对酪氨酸酶的抑制作用，设备模型如下：
图1：应用柱后衍生化法进行在线抗氧化剂分析的设备模型
结论
PLPF的水提取物和乙醇提取物均对TYR、COX-2、胶原酶和蛋白糖化具有显著的抗氧化和抑制作用。通过UPLC/PDA-QTOF-ESI-MS/MS初步鉴定出27种化合物，其中包括4种单萜苷、六种酚类、六种单宁、十种类黄酮和一种羟基肉桂酰胺。该研究对于基于POBA的在线抗氧化剂和TYR抑制剂筛选分析的开发和应用具有重要参考价值，可加速药物发现进程。基于生物活性的筛选分析与传统的定量生化分析相结合表明，没食子酸衍生物是PLPF 提取物的抗氧化和抗TYR能力的主要贡献者。主要类黄酮往往是AGE的协同抑制剂，而没食子酸衍生物也可能负责抑制胶原酶和COX-2。PLPF及其主要化合物被证明是作为新型药物和美容剂开发的有希望的候选者。
02
2023年波兰华沙大学化学学院的 Elzbieta Sobolewska，Magdalena Tyszkiewicz，Roman Blaszczyk and Magdalena Biesaga运用茜草色素作为衍生剂进行OATD-02的测定（OATD-02是一种处于临床开发中的抗癌精氨酸酶抑制剂， 是一种新型硼酸衍生物）。
OATD-02 的色谱分析普遍存在问题，因为该分子的紫外线吸收较弱，而本文中的实验中的衍生化反应基于OATD-02中的硼酸与茜素溶液之间的反应，且实验方案在选择性、线性、回收率 （>99%）、精密度 （RSD：0.6%）、灵敏度 （LOD：20 μg/mL 和 LOQ：50 μg/mL）、溶液稳定性和稳定性方面均表现得当。
图2：茜素与OATD-02反应形成荧光复合物
图3：OATD-02粗混合物与所有合成杂质（红线）和空白（黑线）的色谱图比较
03
西南化工大学的彭敬东博士课题组发表了基于高效液相色谱-共振瑞利散射法测定人尿液中的法莫替丁和雷尼替丁，雷尼替丁（RNTD）和法莫替丁（FMTD）均为H2受体阻滞剂，是抑制胃酸分泌的药物，具有抑制胃酸和胃蛋白酶活性，通过改善胃粘膜的微循环促进细胞再生和修复的作用，主要用于治疗胃和十二指肠溃疡，但大量服用会损伤肾功能、性腺功能和中枢神经，对人体健康产生不利影响。RNTD和FMTD的半衰期约为2~3 h，主要通过尿液排泄，尿液中的药物浓度变化幅度大且快，因此研究其在尿液样品中的测定方法对于临床用药和科学研究具有重要意义
本文研究发现在pH 4.6的BR缓冲溶液中，RNTD和FMTD能与金属离子Pd（II.）螯合形成阳离子，再与染料赤藓红（Ery）在静电引力和疏水作用下形成三元离子缔合物，导致整个体系的RRS信号急剧增强。基于此，将高效液相色谱作为分离装置，通过柱后衍生系统与共振瑞利散射反应装置联用，经HPLC分离后的RNTD和FMTD，再与柱后衍生系统引入的探针在反应装置中缔合成离子化合物，然后记录得到RRS信号，从而实现对RNTD和FMTD的分析。
图4：HPLC-RRS反应装置示意图
图5：法莫替丁和雷尼替丁标准溶液（A）及实际人体尿液的色谱图（B）
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结论
综合上述文献的内容，柱后衍生的方法不仅可以用于传统应用的定性定量的测试，亦可在科研方面发挥重大的作用，Pickering，作为40年的老品牌，愿怀抱开放的态度与任何有需求的科学家们合作，提供定制化的服务，助力各个科研项目的顺利发展。
在传统的应用方面，追求更加优秀、高性价比的开发方法以及稳定的设备也一直是我们的宗旨，目前我们一直在不断挖掘Pickering柱后衍生仪可测试的应用，欢迎各位客户共同探讨。
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Pickering Onyx PCX柱后衍生仪每个组件都是为柱后分析专门设计，是一款具有柱温梯度程序的柱后衍生系统，仪器布局以易用性、快速监控、快速服务为核心。可以用来进行氨基酸、亚硝酸盐、霉菌毒素、抗生素、六价铬等特殊应用的分析也可进行氨基甲酸酯、草甘膦、黄曲霉等常规应用分析。
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Pickering
Pickering是德祥集团资深合作伙伴之一。美国Pickering Laboratories公司是一家全球专业提供人工测试体液和柱后衍生化学试剂、色谱柱、分析方法等柱后衍生分析整体解决方案的机构，其不断创新及良好的信誉被众多的美国政府机构如EPA、ATF、FDA、AOAC和世界著名的厂商所认可。
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